人源ADAM17基因干扰表达载体的构建与鉴定

摘要

目的 构建靶向人去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,并在人胰腺癌细胞株(PANC1)中鉴定其干扰效率.方法 设计并合成ADAM17基因的shRNA片段,连接到经AgeⅠ和EcoRⅠ消化过的pLKO.1-puro载体中,构建干扰表达载体pLKO.1-puro ADAM17 shRNA,测序鉴定;用干扰载体pLKO.1-puro ADAM17 shRNA转染PANC1细胞,荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)和Western blot法检测干扰质粒的干扰效率;CCK-8法检测其对PANC1细胞增殖的影响.结果 测序结果显示,成功构建了靶向人ADAM17基因shRNA的表达载体,且该干扰载体可将PANC1细胞中ADAM17的相对表达量下调65％ 以上,并能显著抑制PANC1细胞增殖.结论 成功构建了ADAM17基因干扰质粒.