荧光定量聚合酶链反应检测临床痰液标本中军团菌

摘要

目的 建立快速、特异、敏感的TaqMan探针荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法,用于检测军团菌16S RNA基因.方法 军团菌标准菌株购自美国标准菌种收藏所,临床痰标本取自南方医科大学南方医院257例病原不明肺炎住院患者.提取菌种DNA及临床痰标本DNA,通过对标准菌株及临床痰液标本DNA分别进行待考核试剂与16S rRNA PCR检测及测序,验证待考核试剂方法的敏感性、特异性. 结果荧光定量PCR检测灵敏度为10 cfu/mL,比16S rRNA定性PCR检测灵敏度381 cfu/mL高38倍.257例病原不明肺炎患者的临床痰标本细菌培养检出嗜肺军团菌血清型1型1例.待考核试剂和16S rRNA PCR方法检测阳性率分别为8.95%(23/257)和8.95%(23/257),其中2例不符合,1例待考核试剂阳性16S rRNA PCR方法阴性,另一例16S rRNA PCR方法阳性,待考核试剂阴性.二者总符合率为99.22%(255/257),其中阳性符合率为95.65%(22/23),阴性符合率为99.57%(233/234).结论 待考核试剂荧光定量PCR检测军团菌标准菌种敏感性强,特异性好,用于临床痰标本军团菌检测时假阳性率为4.35%,与16S rRNA PCR方法及测序比较具有较好的符合性和等效性.