嗜热厌氧杆菌分解代谢物调控蛋白A的克隆鉴定

摘要

分解代谢物调控蛋白A (CcpA)在低GC含量的革兰氏阳性菌株中,是一类非常重要的全局调控蛋白.本研究中,克隆获得了嗜热厌氧杆菌CcpA的编码基因及其上下游各约400 bp片段的基因序列.研究表明,克隆所得的ccpA基因编码长度为336个氨基酸的蛋白质,其理论等电点为5.69.序列比对分析结果显示,其N端的DNA结合位点具有非常高的序列保守性.在CcpA启动子上游含有cre序列,表明该基因转录存在自体调控.此外考察了克隆所得的CcpA编码基因在葡萄糖存在下,工程菌B.subtilis TA-1中amyE基因的表达及酶活均受到抑制.ccpA基因敲除的枯草芽孢杆菌中过量表达克隆所得的CcpA,证明所获蛋白在葡萄糖存在下,能够有效抑制淀粉酶的活力,且对枯草芽孢杆菌的生长产生负影响.