腾冲嗜热厌氧杆菌ahpC编码基因的克隆表达及生物信息学分析

摘要

为了研究腾冲嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)AhpC在嗜热中的作用,应用PCR技术扩增腾冲嗜热厌氧菌tte0270基因(即ahpC编码基因),构建了原核表达载体pET-28a::ahpC并在大肠杆菌BL21(DE3)表达AhpC,并通过荧光定量PCR分析ahpC在50℃、60℃、75℃和80℃的mRNA表达量;同时利用生物信息学软件分析AhpC在腾冲嗜热厌氧杆菌、单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌中编码氨基酸的基本理化性质和蛋白质三级结构.在BL21(DE3)中腾冲嗜热厌氧杆菌AhpC蛋白能高效的表达,以可溶性形式存在,分子质量为26 ku;荧光定量PCR结果表明腾冲嗜热厌氧杆菌ahpC mRNA表达量随温度升高而提高;生物信息学分析得出AhpC含有220个氨基酸,为酸性亲水性蛋白,等电点为6.126,蛋白质有29.1％的氨基酸参与α-螺旋结构的形成.嗜热菌AhpC中Glu(E)和Lys(K)的含量高于常温细菌.腾冲嗜热厌氧杆菌AhpC的三级结构明显比大肠杆菌和单核细胞增生李斯特菌的更紧凑.结果对腾冲嗜热菌嗜热机制研究具有一定的启发.