华蟾素通过线粒体途径诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的机制

摘要

目的探讨华蟾素诱导人鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制、凋亡的作用机制。方法将人鼻咽癌CNE-2细胞分为阴性、阳性对照组及华蟾素给药组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同水平华蟾素对人鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察药物对细胞形态的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Westernblot)检测线粒体凋亡途径相关蛋白细胞色素C(Cyt-C)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达。结果MTT法检测显示,与阴性对照组相比,阳性对照组及华蟾素组可抑制鼻咽癌CNE-2细胞的增殖,倒置荧光显微镜下可见活细胞、凋亡细胞及坏死细胞,抑制率、凋亡/坏死细胞数量与药物剂量和作用时间呈正相关。FCM检测结果显示,华蟾素作用于CNE-2细胞24、48h后,各华蟾素组凋亡率均高于阴性对照组,且随着华蟾素药物水平升高、作用时间延长,凋亡率也升高,差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot检测结果显示,与阴性对照组相比,阳性对照组和不同剂量的华蟾素组作用于CNE-2细胞24、48h后Cyt-C、caspase-9蛋白的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论华蟾素对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖具有抑制作用,并能诱导鼻咽癌细胞凋亡,其机制可能是通过上调Cyt-C、caspase-9蛋白的表达实现的。