重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定

摘要

目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCRI,并对重组蛋白进行纯化.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCRI全长eDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCRI的重组质粒(pPIC9K-sCRI);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化.结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCRl的酵母细胞表达出重组人sCRI的融合蛋白,48～72 h sCR1融合蛋白表达量最高.此蛋白在凝胶上表现为Mr大于31 KDa的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCRl的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCRI融合蛋白.结论:人sCRI融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.