脊髓薄片制备方法的改进及其脊髓Ⅱ板层神经元突触后电流的记录

摘要

目的 探讨记录脊髓Ⅱ板层神经元兴奋性和抑制性突触后电流的方法.方法 SD雄性大鼠,160～180g,2%氟烷和100%氧气吸入麻醉后快速取腰段脊髓,迅速放入冰冷充氧的人工脑脊液,将约1cm长的脊髓粘立于振动切片机载物台上,同时覆以冰冷的人工脑脊液进行横切片,片厚350～450μm,Kreb'S液提前30min用95%CO2和5%O2预充氧,将切好的脊髓薄片转移其中,34～35℃孵育至少1h后,以备实验记录用.结果在倒置显微镜下可清楚分辨出脊髓Ⅱ板层神经元.采用全细胞电压钳记录技术,给予选择性受体阻断剂以分离不同的突触后受体电流.在钳制电压为-70mV时,可以记录到谷氨酸能的兴奋性突触后电流(EPSCs);而在钳制电压为0mV时,可以记录到抑制性突触后电流(IPSCs).结论该方法为研究脊髓Ⅱ板层神经元递质释放提供了有效的途径.