四种冷冻保护剂深低温保存人小口径动脉的实验研究

摘要

目的 评估二甲基亚砜、甘油、丙二醇、乙二醇四种冷冻保护剂在深低温保存人小口径动脉时的保护效果,筛选合适的人小口径动脉冷冻保护剂及其配比浓度,为血管深低温保存提供一定的理论依据.方法 本研究收集2016年9月至2018年9月遵医五院行截肢术后的小口径动脉45个片段,每一片段0.5cm,将45个片段按冷冻保护剂的类型和浓度随机分为9组(8个实验组,1个对照组),每组5个片段,分别为:二甲基亚砜30％组、二甲基亚砜40％组、甘油30％组、甘油40％组、丙二醇30％组、丙二醇40％组、乙二醇30％组、乙二醇40％组和对照组.实验组分别使用不同浓度及类型的冷冻保护剂深低温保存30天,对照组不添加冷冻保护剂深低温保存30天.快速复温后石蜡包埋并制片,运用HE染色法观察人小口径动脉的组织结构变化,应用免疫组织化学染色法检测人小口径动脉血管内皮生长因子(vascular endothelia growth factor,VEGF)的表达水平.应用统计学方法对组织结构变化和VEGF的表达水平进行对比,分析各组间的差异有无统计学意义.结果 1.HE染色结果:对照组见内皮细胞大片脱失,内膜结构紊乱,内弹性膜大片断裂、缺失,平滑肌结构损伤;30％乙二醇组见内皮细胞大片脱失,内弹性膜部分断裂、缺失,平滑肌结构部分破坏;40％乙二醇组见内皮细胞大片脱落,部分内弹性膜出现断裂,侵及平滑肌细胞结构;30％丙二醇组见内皮细胞存在小片状脱失,内皮细胞与内弹性膜间有部分空隙,内弹性膜偶见断裂;40％丙二醇组见内皮细胞存在局部脱失,内皮细胞与内弹性膜间有少部分空隙,内弹性膜无断裂;30％甘油组见内皮细胞散在脱失,内皮下层与内弹性膜间见个别空隙,平滑肌细胞结构良好;40％甘油组见内皮细胞连续,内皮下层、内弹性膜及平滑肌细胞结构良好;30％二甲基亚砜组见内皮细胞点状脱落,内弹性膜、中层平滑肌细胞排列规则;40％二甲基亚砜组见内皮细胞连续,排列规则有序,内皮下层、内弹性膜及平滑肌细胞结构良好.2.VEGF免疫组化检测结果:在保护剂浓度分别为30％和40％时,与对照组比较,甘油组、二甲基亚砜组、丙二醇组三组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,乙二醇组小口径动脉VEGF平均光密度值升高,差异无统计学意义(P＞0.05);与乙二醇组比较,二甲基亚砜组、甘油组、丙二醇组三组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与丙二醇组比较,甘油组、二甲基亚砜组二组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与甘油组相比较,二甲基亚砜组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).随着保护剂浓度的增加,二甲基亚砜组、甘油组、丙二醇组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),乙二醇组小口径动脉VEGF平均光密度值显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 1.二甲基亚砜、甘油、丙二醇对人小口径动脉的深低温保存有保护作用,乙二醇的冷冻保护作用不明显.2.二甲基亚砜对人小口径动脉的冷冻保护效果较甘油、丙二醇和乙二醇好.3.浓度不同时,冷冻保护剂对人小口径动脉的保护效果不同.