邻苯二甲酸二丁酯暴露下大型溞miR-34和Bcl-2基因的表达和功能分析

摘要

本文旨在探究miR-34靶基因的功能及邻苯二甲酸二丁酯(Dinbutyl phthalate, DBP)暴露下大型溞miR-34与其靶基因Bcl-2的表达调控关系。首先利用miRbase数据库、Clustal W和MEGA7.0软件分析各物种miR-34序列的保守性;其次通过Targetscan和miRanda分析miR-34的靶基因,并运用GO和KEGG进行miR-34靶基因的功能富集分析;最后采用实时荧光定量PCR方法检测大型溞在环境浓度6 mg/L DBP暴露24 h和48 h后,大型溞miR-34及其靶基因Bcl-2的表达变化。结果显示,miR-34序列在物种进化过程中具有高度保守性,13个物种的序列有17个碱基完全一致。miR-34靶基因的GO和KEGG的功能聚类分析发现,这些靶基因参与多个信号通路,主要富集在细胞内转录调控、信号转导和胞吞作用等生物学过程中。DBP暴露48 h大型溞miR-34的相对表达水平明显上调,靶基因Bcl-2的mRNA相对表达则相反,表明大型溞miR-34与Bcl-2的负调控关系。结果提示miR-34可能在大型溞对DBP毒性作用的响应过程中发挥作用,其中miR-34可通过调控Bcl-2的表达水平来影响大型溞细胞的生命活动。这对于分析水生无脊椎动物在毒性胁迫时的调节应对机制有一定的借鉴作用。