适配体结合量子点技术同时检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157∶H7方法

摘要

目的:基于适配体结合量子点技术,建立一种同时针对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157∶H7两种食源性致病菌快速高效、灵敏的检测方法.方法:利用表面增强拉曼光谱技术筛选出与目标菌结合特异性较好的2种适配体;利用免疫磁珠与适配体偶联技术特异性捕获2种目标菌;选取不同发光原理的2种量子点,并结合量子点荧光标记技术构建"磁珠十目标菌十量子点"的"三明治结构",通过对结构条件优化确定2种目标菌的检出限,并应用到市售无菌牛乳实际样品中进行加标回收率实验.结果:本研究证明所选取的2条适配体与目标菌的结合具有高特异性,可实现对2种目标菌的同时检测.对"三明治结构"优化结果表明:2种目标菌的最佳捕获条件为免疫捕获时间45 min、磁分离时间2 min;适配体最适浓度为400 nmol/L;金黄色葡萄球菌检出限为101 CFU/mL,线性方程为Y=28.51X+126.67 (R2=0.973);大肠埃希氏菌O157∶H7检出限均为102 CFU/mL,线性方程为Y=92.86X-64.67(R2=0.987),其中,Y为荧光强度,X为细菌菌落数的对数值,拟合度良好.且在牛乳样品中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157∶H7回收率分别为94.6％～102.8％和93.4％～100.4％.结论:本研究所建立的方法能够实现同时对2种食源性致病菌快速、高效检测,该方法易操作且灵敏度高,在食品加工生产安全检测方面具有良好的应用前景.