猪肺炎支原体SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要

为建立猪肺炎支原体SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,采用PCR方法扩增猪肺炎支原体P36基因295bp片段,并克隆到pMD18-T载体中,以纯化的重组质粒为模板作荧光定量PCR扩增,建立了猪肺炎支原体荧光定量PCR检测方法,该方法检测灵敏度可达1.5× 101拷贝/μL,与猪鼻支原体、猪大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、猪巴氏杆菌、猪链球菌2型、猪胸膜肺炎放线杆菌均不发生交叉反应,具有很好的特异性和重复性.结果表明,建立的猪肺炎支原体荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床猪支原体肺炎的检测.