重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α的构建及其与ND、IB二联活疫苗联用对鸡免疫功能的影响

摘要

为研究重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α与鸡新城疫(Newcastle disease,ND)、传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)二联活疫苗联用最佳肌肉注射剂量及其对鸡免疫功能的影响。通过RT-PCR扩增鸡干扰素-α(IFN-α)基因,双酶切IFN-α基因和pcDNA3.1(+),T4 DNA ligase连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α;挑选180只海兰褐公雏鸡随机分为6组,每组3个重复,每个重复10只。A组(生理盐水对照组)、B组(疫苗对照组)、C组[疫苗+100μg pcDNA3.1(+)对照组]、D组[疫苗+50μg pcDNA3.1(+)-ChIFN-α试验组]、E组[疫苗+100μg pcDNA3.1(+)-ChIFN-α试验组]、F组[疫苗+200μg pcDNA3.1(+)-ChIFN-α试验组];4日龄时,D、E、F组分别注射pcDNA3.1(+)-ChIFN-α50、100、200μg/只,C组注射pcDNA3.1(+)100μg/只,A、B组注射生理盐水300μL/只,7日龄时除A组外,其他各组均滴鼻、点眼免疫鸡ND、IB二联活疫苗,于49日龄时,对试验鸡进行肾型IB病毒(Nephropathogenic IB virus,NIBV)攻毒试验。PCR结果表明扩增出鸡IFN-α基因为582 bp,通过测序并与NCBI已发表的ChIFN-α基因(登录号EU367971)进行比对,同源性为100%;双酶切、菌液PCR及测序鉴定结果表明重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α构建成功;动物试验结果表明,不同剂量pcDNA3.1(+)-ChIFN-α均能提高鸡外周血阳性T、B淋巴细胞百分率;提高ND病毒(ND virus,NDV)、NIBV疫苗诱导的抗体水平,并能提高鸡对NIBV强毒株的免疫保护率,且100μg剂量组比疫苗对照组的免疫保护率提高10%。本研究确定重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α最佳注射剂量为100μg/只鸡,其不仅能发挥免疫佐剂作用,还可增强鸡ND、IB二联活疫苗免疫保护效果。