血小板活化因子乙酰水解酶融合蛋白的表达、纯化及鉴定

摘要

目的:获得血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)全长编码基因并在GST原核表达系统中表达。方法:通过RT- PCR方法,从正常人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出PAF-AH全长编码基因,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T- 3,转化大肠杆菌BL21并诱导表达,采用GST蛋白纯化系统进行纯化。所得纯化蛋白以SDS-PAGE及Western印迹方法鉴定,并进行酶活性测定。结果:获得了PAF-AH基因,序列分析与GenBank数据库中序列一致。SDS-PAGE及Westem印迹结果显示,诱导表达出可溶性的融合蛋白,其相对分子质量与预期相符。纯化蛋白经Western印迹检测能够被特异性抗体所识别,具有免疫学活性;酶活性检测证实其具有特异的水解PAF的活性。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的PAF-AH蛋白。