应用反转录-套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病毒特异性RNA

摘要

采用５′端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针，结合磁性分离技术和异硫氰酸胍－酚一步法（胍酚法）提取病毒ＲＮＡ，进行反转录－套式ＰＣＲ，检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人血清样本，胍酚法能检测血清中至少几个ＰＦＵ病毒的ＲＮＡ，比磁珠法敏感１０倍，整个检测过程在５小时完成。应用该方法对１３７份汉滩型和汉城型ＨＦＲＳ病人血清进行检测分型，总阳性率达６０．５０％。其中，病程在７日以内（急性期）的病人血清仍能检测到２２．７３％阳性率。扩增产物经打点杂交检测证实为特异性扩增，并能准确分型。与空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）分型的符合率为１００％。对２０份正常人及２４份非ＨＦＲＳ患者血清进行ＰＣＲ扩增，结果均为阴性。将全部试剂做成试剂盒，为基层单位早期诊断肾综合征出血热病人提供了操作简便、特异、敏感、快速、直接的诊断方法。