缺氧—复氧诱导ECV304细胞与中性粒细胞粘附的分子机制

摘要

为探讨缺氧—复氧诱导人脐静脉内皮细胞ECV30 4与中性粒细胞粘附的信号转导机制 ,以缺氧—复氧诱导粘附为模型 ,采用比色法检测粘附率 ,流式细胞术检测ECV30 4细胞表面粘附分子E选择素、细胞间粘附分子 1的表达 ,Westernblot法检测ECV30 4细胞亲环素A、磷酸化细胞外信号调节激酶、总细胞外信号调节激酶、磷酸化p70核糖体S6激酶、总p70核糖体S6激酶蛋白的表达。结果发现 ,经缺氧—复氧处理后 ,ECV30 4细胞E选择素、细胞间粘附分子 1的表达上调 ,其表面中性粒细胞粘附增加。总细胞外信号调节激酶、总p70核糖体S6激酶蛋白表达无明显改变 ,亲环素A蛋白表达明显上调 ,细胞外信号调节激酶和p70核糖体S6激酶显著活化。亲环素A抑制剂环孢霉素A以及亲环素A反义寡核苷酸均明显减轻缺氧—复氧诱导的细胞外信号调节激酶和p70核糖体S6激酶激活 ,显著减少ECV30 4细胞与中性粒细胞粘附。p70核糖体S6激酶阻断剂雷帕霉素显著抑制p70核糖体S6激酶的激活 ,中性粒细胞与ECV30 4细胞的粘附亦明显减少。细胞外信号调节激酶信号通路特异性阻断剂PD980 5 9亦显著抑制ECV30 4细胞与中性粒细胞粘附。结果提示 ,亲环素A 细胞外信号调节激酶 p70核糖体S6激酶信号通路介导缺氧—复氧诱导的ECV30 4细胞与中性粒细胞粘附。