使用OprF作为锚定蛋白在大肠杆菌表面展示脂肪酶及在有机溶剂中筛选对映异构体的应用

摘要

开发了一种新的细胞表面展示系统，使用铜绿假单孢菌的一种主要外膜蛋白OprF作为锚定位点。荧光假单孢菌SIK W1脂肪酶基因通过C端删除融合技术与截短的oprF基因融合。在大肠杆菌表面成功展示了截短的OprF-脂肪酶融合蛋白。通过蛋白杂交分析、免疫荧光显微术和整个细胞的脂肪酶活性确定了截短的OprF-脂肪酶融合蛋白在膜上的定位。为了检测细胞表面展示脂肪酶的酶学特征，在各种条件下考查了细胞整体酶活力和稳定性。细胞表面展示脂肪酶在37℃、pH 8．0时酶活力最高。在水溶液和有机溶液中温育一周后，酶活力还可保留80％以上。将展示脂肪酶的大肠杆菌用于外消旋1-苯基乙醇在正己烷中的对映异构体选择，经36h反应成功获得了对映体超过96％的（R）-苯乙酸乙酯。结果表明OprF作锚定蛋白展示脂肪酶的大肠杆菌可用于各种水相、非水相的生物技术应用。