PTD-Apoptin原核表达载体构建及可溶性表达

摘要

目的:可溶性表达PTD-Apoptin融合蛋白。方法:亚克隆Apoptin基因并人工合成PTD序列,构建原核表达载体pGEX-6p-1-PTD-Apoptin,使载体在E.coli BL21(DE3)中表达并优化。GST亲和纯化天然状态的融合蛋白,并通过MTT实验验证活性。结果:最佳表达条件是25℃、0.1mmol/mL IPTG过夜诱导表达,经GST亲和纯化得到天然状态的单一组分融合蛋白,与胃癌823细胞共孵育后细胞存活率为10.86%,与对照组相比具显著差异。结论:成功获得高生物活性的原核可溶性表达融合蛋白PTD-Apoptin,使胃癌823细胞存活率降至10.86%。