端粒酶启动子突变对EGFP启动效率影响

摘要

目的观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)的突变启动子启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)发光强度的变化情况。方法应用PCR引入突变方法获得hTERT上游序列长约300bp的启动子片段,包括单增强子(E-box)突变序列(2个);双E-box突变序列;单转录因子特异蛋白1(Sp1)结合位点突变序列(5个);Sp1结合位点全部(Sp1-5)突变序列,分别克隆入无启动子的绿色荧光蛋白EGFP的基因上游,稳转入SW579细胞中,观察细胞EGFP的发光强度。结果除了约-110bp的单Sp1突变对EGFP的启动效率影响不大之外,任何一种E-box或Sp1突变的启动子均显示启动效率不同程度的下降,其中双E-box突变的启动子和5个SP1结合位点均突变的启动子启动绿色荧光蛋白的表达强度明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染人端粒酶启动子突变基因,能够抑制SW579细胞EGFP的发光效率,证明人端粒酶启动子的E-box序列、SP1结合序列对启动子的启动效率密切相关,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗提供了基础依据。