Bcr启动子驱动EGFP表达转基因小鼠的制备和初步鉴定

摘要

本研究采用显微注射法制备bcr启动子启动报告基因egfp表达的转基因小鼠,在活体水平验证bcr启动子的启动特异性.首先,以慢性髓性细胞白血病细胞株K562细胞基因组为模板,PCR扩增了1.1kb bcr启动子,在扩增产物的上、下游引物加入了EcoR Ⅰ酶切位点.Ase Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切pEGFP-N1真核表达质粒载体,去除载体自身的CMV启动子,将1.1 kb bcr启动子定向克隆到EGFP绿色荧光蛋白报告基因上游,构建了pbcr-EGFP真核表达载体;重组质粒瞬时转染K562细胞和NIH3T3细胞,进行真和表达验证后,酶切回收获得目标片段,显微注射583枚受精卵,移植到30只受体鼠输卵管中,受体鼠怀孕26只,共生产首建鼠90只,经过PCR检测,4#(♀)、36#(♂)和81#(♂)等3只F0代为转基因整合阳性鼠.