滑液囊支原体RAA快速检测方法的建立与应用

摘要

为了建立一种快速、简便的基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)检测滑液囊支原体(MS)的新型方法,本研究针对MS vlhA基因设计了2对特异性引物。经过优化引物和反应条件,建立了MS的RAA新型检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价,还将其敏感性与常规PCR方法进行比较。应用建立的方法对疑似或确诊的临床样品共100份进行检测。结果表明:建立的基础RAA法可在29℃恒温操作10~15 min即可完成对MS核酸模板的检测;RAA法与大肠杆菌、肠炎沙门菌、鸡毒支原体、新城疫病毒、禽流感病毒、禽传染性喉气管炎病毒、禽传染性支气管炎病毒和禽呼肠孤病毒等其他病原均无交叉反应;对MS基因组DNA的最低检出限为6.53×10^(5)copies/μL,比PCR方法敏感100倍;应用该方法检测了100份临床样本,结果71份阳性,与PCR检测结果一致。研究表明,建立的MS RAA方法具有特异、敏感、快速、简便的特点,方便基层实验室应用。