靶向干扰Kv1.3通道基因表达对大鼠调节性T细胞的影响

摘要

目的 探究靶向RNA干扰(RNAi)KCNA3(Kv1.3)基因后,体外给予依普利酮(eplerenone,EPL),分析Tregs细胞活化增殖的变化.方法 将慢病毒载体转染至大鼠调节性T细胞(Tregs)后,qPCR法和全细胞膜片钳法检测敲减效率.ELISA法检测Tregs组、Tregs+EPL组、RNAi-Tregs组、RNAi-Tregs+EPL组细胞因子IL-10、TGF-β 水平的变化.结果 慢病毒成功转染Tregs细胞,Kv1.3通道mRNA水平和电流密度抑制率分别为78％ 和71.3％;与Tregs组相比,RNAi-Tregs组内外液TGF-β 水平明显降低(P<0.01);Tregs+EPL组内外液TGF-β 水平均降低(P<0.05);与RNAi-Tregs组相比,RNAi-Tregs+EPL组内外液TGF-β 水平无明显变化;而Tregs组、Tregs+EPL组、RNAi-Tregs组和RNAi-Tregs+EPL组内外液IL-10水平变化不明显.结论 Kv1.3通道介导Tregs的活化增殖,而EPL可通过直接抑制Tregs Kv1.3通道,减少Tregs活化增殖,进而抑制TGF-β 的分泌水平,说明依普利酮是Kv1.3通道的特异性阻断剂.