豚鼠心肌组织Cav1.2钙通道蛋白的提取与纯化

摘要

目的 探寻从豚鼠心肌组织中提取纯化全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白的实验方法.方法 采用组织匀浆、超高速离心的方法获得溶解状态的Cav1.2钙通道蛋白,使用亲和层析的方法对钙通道蛋白进行进一步的纯化,再应用Western blot技术使用不同的Cav1.2钙通道抗体对所制备的心肌Cav1.2钙通道蛋白进行鉴定.结果 比较CHAPS和Triton X-100的增溶效果,发现去污剂CHAPS能够更好地促进钙通道蛋白的溶解,且浓度为2%CHAPS是能够使钙通道蛋白溶解且不损害钙通道结构的最适浓度;同时,蛋白电泳和免疫印迹结果显示,提取制备所得的蛋白为心肌Cav1.2钙通道蛋白.结论 亲和层析方法提取了纯度较高的全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白,为系统研究心肌Cav1.2钙通道奠定了坚实的基础.