致肾盂肾炎大肠杆菌粘附素papG基因克隆及序列分析

摘要

目的克隆F13型致肾盂肾炎大肠杆菌(UPEC)132株的粘附素基因papG并作序列分析.方法根据Ⅰ型papG(papGJ96)和Ⅱ型papG(papGIA2)基因序列设计3条引物,PG2和PG3分别为下游3'端引物,PG1为两型papG上游5'端共用引物,并在各引物5'端加入限制性内切酶位点.以UPEC132染色体DNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆入质粒载体,筛选阳性重组质粒作序列分析.结果 UPEC132株以Ⅰ型papG引物扩增时为阴性结果, 以Ⅱ型papG引物扩增时可获得约1 100bp的DNA片段.扩增产物经克隆获得阳性重组质粒pGC39和pGC103,对其序列分析显示papG132编码337个氨基酸,与papGJ96的同源性仅为45%,而与papGIA2的同源性为98.6%.与papGIA2比较,papG132核苷酸序列+3位缺失1个三联体密码,并在特异性受体结合域+49位、+160位和PapD蛋白亚单位作用区+272位、+314位存在错义突变,此外还存在7处同义突变. 结论 UPEC132株的P菌毛不同于相同血清型的UPEC J96株,前者为F13型papA与Ⅱ型papG组合,后者为F13型papA与Ⅰ型papG组合.Ⅱ型PapG粘附力较强,具有重要的临床意义.