恙虫病东方体平潭岛株重组抗原的制备及快速诊断试剂的研制

摘要

目的 制备重组抗原,利用胶体金技术研制恙虫病快速诊断试剂.方法 用PCR扩增出Ptan株编码56kD外膜蛋白长约1 352bp的DNA,克隆至原核载体pET28a,构建了表达载体.表达产物经SDS-PAGE及Western-blot进行鉴定分析.将Ptan株和Gilliam 56kD截短重组抗原混合作为诊断抗原,研制胶体金免疫层析诊断试纸检测血样中的恙虫病特异性总抗体、IgM和IgG.结果 SDS-PAGE表明重组蛋白在相对分子质量约52kD处有表达目的条带,Western-blot证实该蛋白具有免疫活性.胶体金免疫层析法检测抗恙虫病东方体总抗体、IgM、IgG和IFA法检测IgG的敏感性分别为94.5%,81.4%,91.6%和86.2%,胶体金免疫层析法检测总抗体、IgM、IgG特异性分别为98.1%,100%,98.9%.结论 胶体金层析法可替代常规IFA法用于恙虫病诊断.