山东恙虫病疫区病人、鼠、恙螨体内恙虫病东方体分离株基因分型和序列同源性分析研究

摘要

目的：探明山东恙虫病疫区病人、鼠、螨体内恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)流行株Sta56基因型别及序列特征。rn 方法：根据Ot-Sta56kD外膜蛋白基因部分序列设计群、型特异引物，采用Nested PCR技术进行检测、分型，将群引物扩增产物进行RFLP分析，并用双向测序法进序列测定。rn 结果：28株恙虫病东方体山东分离株提取的Ot-DNA群引物扩增产物经SnaB Ⅰ、Hha Ⅰ、Hinf Ⅰ酶切后呈现2种不同的RFLP图谱，经与巳知序列的Ot内切酶图谱相比，其中26份Ot内切酶图谱与日本地方株Kawasaki株具有相似的酶切图谱，但缺乏Hha I的酶切位点。该结果与Nested PCR基因分型的结果相一致。从这26份中选出B 16、FXS2株进行碱基序列测定，结果与Kawasaki型相应DNA片段的碱基序列同源性分别为94.22、95.21%，而与其它5株Ot同源性均少于75.87%，该片段的Hha I酶切位点GCGC变异为GTGC结构。另2株(FXS4，LHGM2株)与Karp参考株具有相同的酶切图谱;碱基序列测定结果，与Karp型相应DNA片段的碱基序列同源性分别为83.03、96.45%。rn 结论：山东恙虫病疫区病人、鼠、螨体内Ot流行株型属于日本Kawasaki型，但有一定的遗传学差异，山东恙虫病东方体Sta56基因Hha Ⅰ酶切位点GCGC变异为GTGC结构在鼠、螨间还存在Karp型Ot。