华支睾吸虫CsSCCRO基因的克隆表达和蛋白纯化

摘要

目的 原核表达华支睾吸虫鳞状上皮癌相关肿瘤基因 (SCCRO)全长编码区序列,获得纯化的重组蛋白,为进一步功能研究做好准备.方法 用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫全长cDNA文库中识别出与人鳞状上皮癌相关基因的同源序列及其全长编码区,将其编码区序列克隆到原核表达载体PET-30a(+),测序鉴定重组质粒,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,重组产物用His-镍蛋白纯化柱纯化.结果 华支睾吸虫鳞状上皮癌相关基因长度为1 218bp,其全长编码序列长度为780bp, 编码259个氨基酸,1-22位为分泌信号肽,在羧基端有一个高度保守的区域.该基因在大肠杆菌中得到了高效的可溶性表达,重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度可达98%.结论 鳞状上皮癌相关基因的PET-30a(+)原核重组质粒在大肠杆菌BL-21/DE3中可以稳定高效地表达可溶性蛋白.