18S rRNA基因巢式PCR-RFLP分析两株牛源隐孢子虫分离株

摘要

目的 18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)鉴定上海(简称SH-BOV)和徐州(简称XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫.方法 改良-抗酸染色确定感染隐孢子虫的上海株和徐州株牛粪,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA软件进行同源性和系统发育分析.同时扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切,且XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后进行RFLP分析.结果 通过18S rRNA基因分析,SH-BOV与1株巴西牛隐孢子虫Cryptospridium bovis同源性为100%,种系发育树上两者在同一分支;XZ-BOV与安氏隐孢子虫C. andersoni同源性为99%,种系发育树上两者在同一分支.扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切后,可鉴别出SH-BOV为C. bovis,XZ-BOV为C. andersoni或C. muris.XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后可鉴别出XZ-BOV为C. andersoni.结论 上海株牛源隐孢子虫(SH-BOV)鉴定为牛隐孢子虫(C. bovis),徐州株牛源隐孢子虫(XZ-BOV)鉴定为安氏隐孢子虫(C. andersoni).