结核分枝杆菌T7噬菌体展示基因组DNA文库的构建与鉴定

摘要

目的 利用T7噬菌体作为载体,构建结核分枝杆菌的基因组DNA文库.方法 提取MTB的基因组DNA,用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ进行双酶切,以对基因组DNA进行片段化,并在其末端加上定向的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ黏性末端,用DNA片段纯化分离柱除去小于200 bp的片段和多余接头.将DNA片段与T7 10-3b噬菌体连接,经包装蛋白进行包装后转入BLT5403宿主菌以构建T7噬菌体展示基因组DNA文库,并检测文库的滴度和随机性.结果 成功提取到较高质量的MTB基因组DNA;构建的T7噬菌体展示基因组DNA文库的滴度约为6×106 pfu/cm3;用PCR检测结果表明,在随机挑取的16个噬菌斑中,其重组率为100％,且插入片段都介于250～2 000 bp左右.结论 成功构建了MTB T7噬菌体展示基因组DNA文库,为从基因组范围筛选MTB的优势抗原奠定了前期实验基础.