微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后的成骨分化潜能

摘要

背景:随着转基因技术的迅速发展,基因治疗和微囊化技术结合,形成微囊化基因给药技术.微囊化除了为干细胞生长提供良好的三维微环境,保证干细胞的大规模体外培养外,还可利用选择透过性膜将移植物与宿主免疫系统隔离,有效避免同种异体移植过程中的免疫排斥反应.目的:观察微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后的增殖活性及成骨分化潜能.方法:采用脉冲式高压静电微囊制备仪制备出APA-Foxc2-BMSCs微囊复合体,行吖啶橙/溴化乙锭双染色;共培养微囊化转基因骨髓间充质干细胞和成骨细胞,共培养3周,MTT检测细胞增殖能力;共培养1周,行碱性磷酸酶活性定量检测;共培养1,2周,行碱性磷酸酶定性检测及von Kossa染色;共培养2周,Western blot、Real time PCR检测成骨因子表达.结果 与结论:①吖啶橙/溴化乙锭染色见微囊内70％-80％的细胞染成绿色,镜下未见细胞逃出微囊及在囊外染色;破囊后重新培养的骨髓间充质干细胞生长良好;②微囊化共培养组碱性磷酸酶染色见胞浆内出现较多的棕褐色阳性颗粒,碱性磷酸酶活性显著升高,出现钙基质沉积;③微囊化共培养组Ⅰ型胶原、血小板衍生生长因子蛋白和mRNA表达显著升高;④结果表明,微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养可增强骨髓间充质干细胞增殖活性,促进骨髓间充质干细胞成骨分化.