诱导巨噬细胞向M2极化降低糖尿病视网膜病变模型小鼠的氧化损伤

摘要

背景:糖尿病视网膜病变的主要标志之一就是新生血管的持续生成,而TNFSF15作为血管生成抑制因子可显著抑制血管生成.目的:探究TNFSF15通过诱导巨噬细胞向M2极化降低糖尿病视网膜病变小鼠氧化损伤的作用机制.方法:选取40只雄性CD-1小鼠,随机分为正常组、模型组、TNFSF15组和血管内皮生长因子组,每组10只.除正常组外,其他各组小鼠采用链脲佐菌素及眼底血管造影进行糖尿病视网膜病变建模.建模成功后,TNFSF15组小鼠腹腔内注射250 mg/L的TNFSF15;血管内皮生长因子组小鼠腹腔内注射250 mg/L的血管内皮生长因子;正常组和模型组同期灌胃同体积生理盐水.实验完成后,取小鼠视网膜组织,提取巨噬细胞进行体外培养,分为2组,加入TNFSF15的为观察组及加入PBS的为对照组.苏木精-伊红染色检测小鼠网膜病理形态;ELISA法检测血清中TNFSF15、血管内皮生长因子、丙二醛、超氧化物歧化酶水平;Western blot检测小鼠视网膜组织中诱导型一氧化氮合酶、Ym1、CD206、CD163的蛋白表达,并观察体外巨噬细胞M2极化结果.实验方案经天津医科大学实验动物伦理委员会批准(批准号为TJYKDX2021025).结果 与结论:①与正常组比较,模型组血糖及24 h尿量、血清血管内皮生长因子及丙二醛水平、视网膜巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶蛋白表达明显升高(P＜0.05),上述指标TNFSF15组较模型组明显降低(P＜0.05),血管内皮生长因子组较TNFSF15组明显升高(P＜0.05);与正常组比较,模型组体质量、血清中TNFSF15及超氧化物歧化酶水平、Ym1、CD206及CD163蛋白表达明显降低(P＜0.05),上述指标TNFSF15组较模型组明显升高(P＜0.05),血管内皮生长因子组较TNFSF15组明显降低(P＜0.05);②正常组小鼠视网膜结构正常且排列整齐;模型组与血管内皮生长因子组出现明显病变;TNFSF15组与前两组相比,其新生血管明显减少,视网膜结构趋近正常;③细胞实验中,与对照组相比,观察组的Ym1、CD206及CD163的蛋白表达显著增加(P＜0.05);④结论:TNFSF15可能是通过诱导巨噬细胞向M2极化,来降低糖尿病视网膜病变小鼠的氧化损伤,改善视网膜病变程度.