牛膝总皂苷调控Nampt/NAD/Sirt1轴诱导骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化

摘要

背景:研究表明,骨髓间充质干细胞可向髓核样细胞分化,但分化机制尚不明确。目的:利用牛膝总皂苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化,并探讨Nampt/NAD/Sirt1轴在其中的作用。方法:取第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞,随机分成4组:①骨髓间充质干细胞组;②骨髓间充质干细胞+牛膝总皂苷组;③骨髓间充质干细胞+牛膝总皂苷+烟酰胺单核苷酸组(烟酰胺单核苷酸为促NAD合成的外源性小分子物质);④骨髓间充质干细胞+牛膝总皂苷+FK866组(FK866为烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂)。连续诱导培养14 d,阿尔新蓝染色法检测细胞内糖胺多糖含量,RT-PCR检测髓核样细胞相关基因COL2、Aggrecan、KRT19和PAX1 mRNA表达,Western blot检测COL2的蛋白表达,Sirt1测定试剂盒检测Sirt1活性,NAD^+/NADH试剂盒检测NAD^+含量。结果与结论:①与骨髓间充质干细胞组相比,骨髓间充质干细胞+牛膝总皂苷组能够使糖胺多糖、髓核样细胞相关基因表达、COL2蛋白表达、Sirt1活性、NAD^+含量明显增加(P<0.05);②与骨髓间充质干细胞+牛膝总皂苷组相比,骨髓间充质干细胞+牛膝总皂苷+烟酰胺单核苷酸组糖胺多糖、髓核样细胞相关基因表达、COL2蛋白表达、Sirt1活性和NAD^+含量增加(P<0.05);相反,骨髓间充质干细胞+牛膝总皂苷+FK866组上述指标均降低(P<0.05);③结果表明,牛膝总皂苷可诱导大鼠骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化,Nampt/NAD/Sirt1轴在其中发挥促进作用。