非接触共培养条件下软骨细胞诱导骨膜细胞向软骨细胞分化

摘要

背景：在非接触共培养条件下，软骨细胞可诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞。骨膜细胞作为软骨修复的种子细胞，其与软骨细胞共培养的作用及影响鲜有研究。目的：通过软骨细胞与骨膜细胞非接触共培养，利用软骨细胞诱导骨膜细胞向软骨细胞分化。方法：采用胰酶、Ⅱ型胶原酶消化法分离兔关节软骨细胞；组织块培养法分离兔骨膜细胞。分别取第2代软骨细胞和骨膜细胞，按1∶1比例通过transwell培养板进行非接触共培养作为实验组，单纯骨膜细胞培养作为对照组。培养2周后，倒置显微镜观察2组细胞形态;Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色检测2组细胞的Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成；RT-PCR检测2组细胞的蛋白聚糖、Ⅱ型胶原α1和性别决定区Y框蛋白9 mRNA表达水平。结果与结论：①培养2周后，实验组共培养骨膜细胞逐渐变为类圆形软骨细胞形态，对照组骨膜细胞仍为长梭形；②实验组共培养骨膜细胞的Ⅱ型胶原免疫组化、甲苯胺蓝染色均为阳性，对照组为阴性；③RT-PCR结果显示，实验组共培养骨膜细胞的蛋白聚糖、Ⅱ型胶原α1、性别决定区Y框蛋白9 mRNA相对表达量明显高于对照组；④结果提示，非接触共培养条件下，软骨细胞可以诱导骨膜细胞向软骨细胞分化。