猪圆环病毒2型衣壳蛋白(Cap)在293T细胞中的亚细胞定位

摘要

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因编码病毒的核衣壳蛋白(Cap),该蛋白属于病毒保护性抗原,具有重要免疫功能.本研究以PCV2 871毒株基因组为模板,用特异性上下游引物扩增获得ORF2基因,利用真核表达载体构建了表达PCV2 Cap蛋白的重组质粒pCAGGS-ORF2.采用脂质体将pCAGGS-ORF2转染至293T细胞,用抗PCV2-Cap单克隆抗体对重组质粒转染细胞进行了免疫活性分析和免疫荧光检测,表明Cap蛋白在细胞中获得表达;利用共聚焦显微镜对Cap蛋白在293T细胞中的亚细胞定位观察结果表明,转染24 h后可见Cap蛋白的表达随培养时间延长显著增多,72 h达到高峰,表达的Cap蛋白主要分布在细胞核中.构建的pCAGGS-ORF2真核表达重组质粒在293T细胞中的表达,为进一步PCV2基因疫苗的研制奠定了基础.