猪传染性胃肠炎病毒NSP5蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

摘要

为制备猪传染性胃肠炎病-毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(rNSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接EHSA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(5c3).MAb亚类鉴定结果显示其抗体亚类为IgG1/κ链.杂交瘤细胞培养上清液和腹水的效价分别为1:6 400和1:105.Western blot鉴定表明该MAb能够识别原核及真核表达的NSP5重组蛋白.利用肽扫描法鉴定显示,该MAb识别的抗原表位为286EFTPTEVIRQMYGVN300.本研究制备的MAb及其抗原表位的鉴定,为TGEV NSP5蛋白结构和功能的研究奠定了基础.