禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

摘要

旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞株2G5制备腹水并纯化,利用间接免疫荧光试验(immunofluores-cence assay,IFA)和Western blot鉴定该单抗的特异性.用制备的单抗包被酶标板,通过一系列的优化,建立了FAdV-4 Fiber2双抗夹心ELISA检测方法.通过逐步截短分析鉴定出单克隆抗体识别的抗原表位区域.结果表明:成功获取3株单克隆细胞株2G5、2G8、4C2.MAb 2G5可与原核表达纯化的Fiber2蛋白及FAdV-4特异性反应.建立的双抗夹心ELISA检测方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性.该MAb识别的表位序列是N端aa1-33.本研究成功制备了具有良好Western blot 和 IFA反应原性的单克隆抗体,为Fiber2蛋白功能研究和FAdV-4新型表位疫苗商品化研发奠定了基础.