斑马鱼模型体内评价野生冬虫夏草的功效

摘要

目的冬虫夏草又名虫草,是我国民间惯用的一种名贵滋补药材,本研究欲利用斑马鱼模式动物,体内评价野生冬虫夏草的功效,包括化疗药(长春瑞滨)引起的中性粒细胞减少症和贫血的改善作用,以及对巨噬细胞吞噬功能的促进作用。方法虫草浓度设置为62.5,125,250,500和1000μg·mL-1,同时设置空白对照组,给药方式为水溶;实验用鱼选择黑色素突变性Albino品系(贫血改善作用评价和巨噬细胞吞噬功能评价)和中性粒细胞绿色荧光在转基因MPO品系(中性粒细胞减少症改善作用评价),斑马鱼年龄均为2 dp(f2 d post-fertilization),每个浓度处理30尾斑马鱼,药物处理至实验终点后(贫血改善和中性粒细胞减少症评价实验终点为3 dpf;巨噬细胞吞噬功能实验终点为5 dpf),除中性粒细胞减少症改善作用评价实验斑马鱼不需染色外,贫血改善作用实验和巨噬细胞吞噬功能评价实验斑马鱼分别经过特异性染料进行红细胞和巨噬细胞染色。实验评价指标为斑马鱼炎症部位中性粒细胞数量、心脏位置红细胞染色强度和头部背面观吞噬墨汁的巨噬细胞数量,随后对数据进行统计分析,定量评价野生冬虫夏草对化疗药物引起的中性粒细胞减少症和贫血的改善作用,以及对巨噬细胞吞噬功能的影响。结果实验数据显示,(1)对中性粒细胞减少症的改善作用:在浓度范围为62.5~500μg·mL-1时,对化疗药物诱发的斑马鱼中性粒细胞减少症无改善作用;浓度为1000μg·mL-1时,诱发斑马鱼全身中性粒细胞数量显著增加(P<0.01),提示虫草对化疗药长春瑞滨引起的斑马鱼中性粒细胞减少症具有改善作用。(2)对贫血的改善作用:浓度为125μg·mL-1的虫草可显著增加斑马鱼心脏部位红细胞数量(P<0.01),提示该浓度可明显改善化疗药长春瑞滨引起的斑马鱼贫血,而其他浓度处理后均无改善作用。(3)对巨噬细胞吞噬功能的影响:浓度为62.5μg·mL-1时,对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能无改善趋势;浓度为125μg·m L-1时,对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能具有明显改善作用(P<0.01);而浓度为250~1000μg·m L-1时,对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能反而有抑制趋势,但无统计学差异。结论野生冬虫夏草对化疗药引起的中性粒细胞减少症和贫血均有显著的改善作用,同时可促进巨噬细胞的吞噬功能。