自噬抑制剂巴弗洛霉素A1对巨噬细胞极化的影响

摘要

目的:探讨自噬下游抑制剂巴弗洛霉素A1(bafilomycin A1,Baf A1)对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7极化的影响.方法:用Baf A1作用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,酶联免疫吸附实验检测M1/M2极化相关细胞因子的含量;流式细胞术检测细胞表面M1/M2极化相关标志物;免疫荧光观察自噬小体形成情况;Western blot检测自噬相关蛋白水平变化.结果:Baf A1处理后,RAW264.7细胞分泌的促炎性细胞因子肿瘤坏死因子 α(TNF-α)显著增高(P<0.01),而抑炎性细胞因子IL-10和IL-13的含量变化无显著差异.Baf A1处理的细胞表面标志物中CD197和HLA-DR(M1标志物)双阳性率与对照组相比显著升高(P<0.05),说明Baf A1可以诱导巨噬细胞向M1方向极化.免疫荧光结果显示,Baf A1处理后细胞自噬小体显著增多(P<0.05).Western blot结果显示Baf A1处理后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达显著升高(P<0.05),而P62蛋白表达无显著差异.在自噬激活剂雷帕霉素处理组中,自噬体同样显著增多(P<0.05),但P62蛋白表达显著降低(P<0.05).结论:巴弗洛霉素A1可以诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向M1方向极化,可能与其抑制自噬下游自噬溶酶体的形成有关.