携带增强型绿色荧光蛋白基因的shRNA真核表达载体的构建

摘要

目的:构建携带EGFP的shRNA真核表达载体.方法:应用PCR的方法从pBSK/U6质粒上扩增出U6启动子及其下游的Xbal、SalI和BamHI酶切位点,并增加NotI位点.将扩增的产物连入pEGFP-C1载体MluI位点处,构建成携带EGFP的siRNA真核表达载体.应用该载体介导针对EGFP的短发夹环RNA(pEGFP/U6/EGFP),转染U251细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测EGFP的表达,验证所构建载体在细胞内产生RNA干扰的效果.结果:与对照组比较pEGFP/U6/EGFP在细胞内对EGFP的抑制效果达89.8%.结论:成功构建携带EGFP的shRNA真核表达载体.