甘蓝型油菜全基因组cDNA FOX-hunting过表达文库构建

摘要

为系统解析甘蓝型油菜基因功能,结合FOX-hunting和Gateway重组技术,以4种激素和4种非生物胁迫处理的甘蓝型油菜幼苗根和叶片及成熟期种子和角果全长cDNA为混样,构建了全长cDNA FOX-hunting过表达文库.经检测,初级文库滴度为3.0×106,库容为1.2×107 CFU;次级FOX-hunting过表达文库滴度为2.6×106,库容为1.04×107 CFU.次级文库菌液PCR鉴定表明,阳性克隆率为96％,扩增均为250～3000 bp随机分布的单一条带,表明初级文库已较好地重组到pJVC55载体上.农杆菌转化后的克隆测序发现,140个克隆中有12个克隆为非特异扩增.GO富集分析发现剩余128个基因中,除21个基因功能富集于光合作用途径外,其余基因在转录因子和激酶中随机分布,且功能涉及器官发育、物质代谢和胁迫响应等多个方面.上述结果表明,本研究构建的甘蓝型油菜FOX-hunting过表达文库无功能偏向性、多态性丰富、完整性高,可作为油菜功能基因组的研究基础.