血小板活化因子对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制

摘要

目的探讨血小板活化因子（PAF）对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制,为卵巢癌的治疗提供新的靶点。方法 （1）以100nmol/L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞,均以仅加入二甲基亚砜（DMSO）为对照,采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数。（2）以不同浓度（分别为0、0.1、1、10、100、1000nmol/L）的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）、磷酸化CREB（p-CREB）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白的表达水平;以100nnlol/L的PAF处理不同时间（分别为0、5 min、10min、30min、1h及12h）后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白（p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）、CREB及p-CREB蛋白的表达水平,上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测。（3）OVCA429细胞在加入PAF（100nmol/L）的基础上,分别加入各蛋白的抑制剂,即PAF受体（PAFIt）抑制剂——WEB2076（50μmol/L）、p-p38 MAPK抑制剂——SB203580（10μmol/L）、CREB结合蛋白（CBP）-CREB相互作用抑制剂——217505（25μmol/L）、实验分为6组:PAlF组、PAF+WEB2076组、PAF+SB203580组、PAF+217505组、PAF+SB203580+217505组及空白对照组,采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB、MMP-2蛋白的表达强度。结果 （1）体外侵袭实验显示,予PAF处理后,OVCA429细胞的穿膜细胞数[（118±23）个]明显多于其对照细胞[（36±8）个,P＜0.01],而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[（45±13）个]与其对照细胞[（53±9）个]比较无明显变化（P＞0.05）。（2）不同浓度的PAF处理后,OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性（P＜0.01）,0.1nmol/L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平明显升高,至100nmol/L时达高峰;而CREB蛋白的表达无明显变化。100nmol/L的PAF处理不同时间后,OVCA429细胞中p38 MAPK、CREB蛋白表达无明显变化;而p-p38 MAPK、p-CREB蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）,至处理10min时达高峰,随后逐渐降低。（3）与空白对照组比较,PAF组细胞中p-p38MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显增强。与PAF组比较,PAF+WEB2076组、PAF+SB203580组、PAF+SB203580+217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显减弱,但PAF+SB203580+217505组与PAF+WEB2076组及PAF+SB203580组相比无明显差异;PAF+217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB蛋白的表达强度无明显变化,但其MMP-2蛋白的表达强度明显减弱。结论 PAF可促进卵巢浆液性癌OVCA429细胞的侵袭,这一作用可能是通过p38MAPK激活转录因予CREB,进一步上调MMP-2蛋白的表达而实现的。