一种重组腺病毒载体的扩增、纯化和病毒滴度检测方法

摘要

目的建立扩增、纯化和生物活性鉴定重组腺病毒AxCA-BDNF的有效方法,为进一步研究应用腺病毒介导的BDNF进行神经系统疾病的基因治疗奠定基础.方法应用人胚肾293细胞作为包装细胞,扩增携带BDNF cDNA表达片段的重组腺病毒载体AxCA-BDNF;利用改良的CsCl超速离心法对其进行纯化;应用病毒空斑试验,对纯化病毒液进行病毒生物活性测定.结果获得了50μl纯化病毒液;病毒滴度达2.2×108～1.8×10 10pfu/ml.结论通过培养扩增293细胞,可成功扩增重组腺病毒AxCA-BDNF;纯化病毒液量可完全满足体内基因转染实验的需要;病毒空斑实验证明其具有高强度的生物活性.