人巨细胞病毒pp65 IgG亲和指数在人巨细胞病毒原发感染小鼠模型中的标志作用

摘要

目的通过对人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）原发感染 BALB/c 模型小鼠感染状态的实验研究,探索检测 HCMV pp65 IgG 亲和指数（avidity index,AI）在原发感染诊断中的意义和作用。方法取6～8周龄 SPF（Specific Pathogen Free）级 BALB/c 雌性小鼠30只,分为5组,每组6只,分别用2×10~6、2×10~5、2×10~4、2×10~3和2×10~2PFU/ml 的5个剂量的病毒悬液腹腔注射小鼠,1.0 ml/只;另取浓度为2×10~6 PFU/ml 剂量的病毒,经56℃30 min 灭活后,1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为灭活对照组;同株同代的 HF 细胞悬液1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为 HF 细胞对照组。各组小鼠于屏障系统内饲养1个月后,检测小鼠的感染状态。病毒分离检测脑、肺组织中感染性病毒颗粒,观察 HCMV 特异性细胞病变效应,PCR 试验检测细胞培养物 UL83基因,间接免疫荧光试验检测细胞玻片 pp65抗原;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测小鼠脑、肺组织中HCMV pp67的转录;同时,用本室自制的截短 pp65抗原制备的 ELISA 试剂盒检测血清标本中 HCMVpp65特异性 IgM 抗体和 IgG-AI。结果 2×10~6PFU/ml和2×10~5PFU/ml 剂量的病毒感染小鼠后,脑、肺组织中均可检测到感染性病毒颗粒,感染率均为100%;RT-PCR 均可检测到小鼠脑、肺组织中pp67转录产物;血清学检测这两组小鼠 HCMV pp65 IgM 均为阳性,HCMV pp65 IgG-AI＜50%;检测结果判断该两组小鼠为 HCMV 原发感染。余低剂量病毒组、灭活病毒组和人胚成纤维细胞（HF）对照组检测结果均为阴性。结论 HCMV AD169株可感染 BALB/c 小鼠,初次感染病毒1个月后可表现原发感染状态;以 HCMV pp65重组蛋白为抗原检测特异性 IgM 抗体以及相应 IgG-AI 间接 ELISA 法,可作为对 HCMV 原发感染的初筛手段,是诊断 HCMV 原发感染有效的方法之一。