钙池操纵性钙内流在慢性缺氧致肺动脉平滑肌细胞内钙浓度升高中的作用及机制

摘要

目的探讨钙池操纵性钙内流（SOCE）在慢性缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)改变和细胞增殖中的作用及机制。方法原代培养大鼠PASMC,分为常氧组（21%O2）和缺氧组（4%O2）,活细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测PASMC增殖,细胞内钙浓度检测系统检测[Ca2+]i和SOCE,并观察钙池操纵性钙通道（SOCC）拮抗剂SKF96365和氯化镍对缺氧组PASMC SOCE的影响。结果缺氧24 h、36 h、48 h、60 h,PASMC增殖和升高[Ca2+]i的效应呈时间依赖性,缺氧60 h促进PASMC增殖（吸光度值1.12±0.09比0.71±0.05;P＜0.05）和[Ca2+]i升高[（214.8±20.4）nmol/L比（115.2±13.2）nmol/L;P＜0.05]的作用最明显。含硝苯地平（5μmol/L）的无钙Krebs液孵育PASMC,环匹阿尼酸（CPA,10μmol/L）导致PASMC[Ca2+]i小幅升高,△[Ca2+]i峰值为（113.3±49.3）nmol/L,慢性缺氧（4%O2,60 h）使PASMC[Ca2+]i升高幅度增加,△[Ca2+]i峰值达（193.2±22.7）nmol/L（P＜0.05）;恢复PASMC外Ca2+后,CPA使PASMC[Ca2+]i显著升高,△[Ca2+]i峰值达（328.0±56.7）nmol/L,慢性缺氧导致CPA诱导的PASMC[Ca2+]i升高更显著,△[Ca2+]i峰值高达（526.0±33.7）nmol/L（P＜0.05）;SKF96365（50μmol/L）和氯化镍（500μmol/L）均能抑制慢性缺氧条件下CPA诱导的PASMC[Ca2+]i升高,△[Ca2+]i从（526.0±33.7）nmol/L分别降至（170.4±26.4）nmol/L和（177.4±45.9）nmol/L（P值均＜0.05）。结论慢性缺氧促进大鼠PASMC肌浆网中Ca2+释放,并增强SOCC活性,使经由SOCC内流的SOCE升高,从而导致PASMC的[Ca2+]i升高,进而促进大鼠PASMC增殖。