脑红蛋白在氧糖剥夺-复氧复糖诱导人神经母细胞瘤细胞线粒体膜电位去极化及活性氧生成中的作用

摘要

目的探讨脑红蛋白（NGB）在氧糖剥夺-复氧复糖诱导的人神经母细胞瘤细胞线粒体膜电位去极化及活性氧生成中的作用。方法在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中,使用慢病毒干扰NGB表达,建立NGB表达敲减及相应的空载病毒稳转株。细胞行氧糖剥夺-复氧复糖处理。荧光实时定量PCR检测人神经母细胞瘤细胞NGB mRNA表达水平,免疫印迹检测人神经母细胞瘤细胞NGB蛋白表达水平。线粒体膜电位特异性染料JC-1染色,观察线粒体膜电位变化。DCFH-DA染色,检测细胞内总活性氧水平。检测人神经母细胞瘤细胞释放乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果氧糖剥夺-复氧复糖后,NGB mRNA及蛋白水平升高,分别于4 h和8 h达高峰（2.04±0.35,1.69±0.18）。NGB转染干扰NGB慢病毒较转染空载病毒线粒体膜电位去极化水平降低[荧光比值（JC-1红色/绿色比值）1.10±0.10比1.46±0.11,P＜0.05],总活性氧产生增多[（36.30±5.32）荧光强度/细胞比（16.26±2.97）荧光强度/细胞,P＜0.05],且LDH释放增多[（63.42±6.14）%比（49.65±5.09）%,P＜0.05]。结论 NGB对维持线粒体稳态起重要作用。干扰NGB表达可导致细胞在缺血缺氧状况下线粒体损伤加重,活性氧释放增多,细胞损伤加重。