体外诱导铜绿假单胞菌对环丙沙星及亚胺培南交叉耐药

摘要

目的：研究环丙沙星及亚胺培南体外对铜绿假单胞菌的耐药诱导作用及铜绿假单胞菌对环丙沙星及亚胺培南交叉耐药机制。方法：用含药琼脂平板法，以临床分离的对环丙沙星及亚胺培南敏感铜绿假单胞菌PA5筛选交叉耐药菌，计算耐药突变频率及交叉耐药率。应用聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR-SSCP）、膜蛋白电泳及细菌对药物摄取分析，对体外诱导交叉耐药菌进行耐药机制研究。结果：环丙沙星在1×MIC、2×MIC浓度时诱导耐药突变频率分别为170×10-9及260×10-9,交叉耐药率9.2%；亚胺培南在1×MIC及2×MIC浓度时诱导耐药突变频率分别为40×10-9及200×10-9，交叉耐药率20.8%。9株体外诱导交叉耐药菌旋转酶gyrA基因PCR-SSCP检测分析发现，与敏感菌PA5比较，仅1株环丙沙星诱导交叉耐药菌的DNA条带相对位置发生改变；4株交叉耐药菌相对分子质量为43?000～67?000的外膜蛋白带消失；细菌对环丙沙星摄取分析表明，9株交叉耐药菌胞内的药物浓度仅为PA5的1/2～1/3，加入氰氯苯腙（CCCP）后，胞内药物浓度上升至PA5水平。结论：环丙沙星与亚胺培南在体外均可诱导铜绿假单胞菌交叉耐药菌；其机制以药物主动外排为主，外膜蛋白通透性改变对部分耐药菌亦有一定的作用。