CILP-MBP基因重组蛋白的亚克隆构建及温度可溶性诱生表达

摘要

目的:构建CartilageIntermediate LayerProtein(CILp)基因组后半部分(C2)亚克隆可溶性重组蛋白表达系统.方法:应用基因克隆技术,提取C2的3个首尾互相重叠的小片段的目的基因(C2F1,C2F2,C2F3),将其重新克隆到pMAL-eHis表达载体中,分别命名为C2F1,C2F2,C2F3-MBP,并尝试在用化学诱导(IPTG)的同时,用不同的温度(22℃,30℃,37℃)来诱导重组基因表达可溶性重组蛋白.结果:重新构建表达载体后,经过异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)化学诱导,在各种诱导温度下重组载体均可表达目的基因蛋白,但在30℃下有大量的可溶性蛋白表达,而在37℃时,重组蛋白主要以不溶性包涵体形式表达,22℃时蛋白不能被充分诱生表达.基因测序和SDS-PAGE,Western Blot结果均表明这3种重组蛋白含有目的基因和羧基末端的6个组氨酸残基,从而为下一步的亲合层析提供了便利条件.结论:成功构建了C2部分的3个小片段的可溶性MBP融合蛋白表达载体,从而为进一步研究CILP功能提供了重要的工具.