HIV-1 gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定

摘要

目的:筛选可作为小分子先导化合物的HIV-1 gp41 C螺旋模拟位,为开发抗HIV-1早期感染的小分子药物奠定基础.方法:以源于HIV-1 gp41 N端的肽N36为靶,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选.利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析.结果:3轮筛选后随机挑取26个噬菌体克隆,ELISA鉴定表明有16个克隆可与N36结合,将其中10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列,每一克隆至少含有2个疏水氨基酸,其中9个克隆均有WW,7个克隆有WWH保守序列.挑选阳性噬菌体克隆No.8进一步鉴定,游离N36肽阻断No.8克隆与固相化N36结合,C34肽竞争抑制N36肽与No.8克隆结合(IC50为12.5 μg/ml).结论:表达WW保守序列的肽模拟HIV-1 gp41 C螺旋与N螺旋结合,该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持.