T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对宫颈癌细胞生物学行为及肿瘤免疫微环境的影响

摘要

目的：探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim-3）对宫颈癌体内外生长进展及免疫微环境的影响。方法：免疫组化染色和qRT-PCR检测宫颈癌组织及癌旁组织中Tim-3表达；将HeLa细胞随机分对照组、NC shRNA组（转染阴性对照NC shRNA慢病毒质粒）、Tim-3 shRNA组（转染Tim-3 shRNA慢病毒质粒），qRT-PCR和Western blot检测转染效果，CCK-8检测细胞增殖活性，EdU染色检测细胞增殖，Transwell检测细胞迁移与侵袭；注射转染Tim-3 shRNA或NC shRNA慢病毒质粒的HeLa细胞构建移植瘤裸鼠模型，定时测量肿瘤体积，21 d后抽取腹主动脉血，称量瘤体质量，HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色检测肿瘤组织生长，ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12表达，流式细胞术检测肿瘤浸润性免疫细胞亚群变化。结果：宫颈癌组织Tim-3表达较癌旁组织显著升高（P＜0.01）；转染成功获得Tim-3低表达的HeLa细胞，与对照组比较，Tim-3 shRNA组HeLa细胞增殖活性下降（P＜0.01）,EdU标记阳性细胞减少（P＜0.01），细胞迁移数和侵袭数均减少（P＜0.01）；与注射转染NC shRNA慢病毒质粒的HeLa细胞组裸鼠比较，注射转染Tim-3 shRNA的HeLa细胞组裸鼠肿瘤体积减小（P＜0.01），肿瘤质量降低（P＜0.01），肿瘤组织内细胞凋亡数增多，增殖数减少，血清TGF-β1、IL-10含量下降（P＜0.01）,IL-2、IL-6含量升高（P＜0.01），脾脏组织CD4+T、CD8+T细胞比例均升高（P＜0.01）。结论：Tim-3在宫颈癌组织中高表达，降低Tim-3表达能够抑制宫颈癌体内外生长，并可能对肿瘤免疫微环境起一定调控作用。