凝血因子ⅩⅢ A亚基mRNA大片段缺失所致遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症的分子机制研究

摘要

目的研究凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）A亚基mRNA DelCD11-279大片段缺失引起遗传性FⅩⅢ缺乏症的分子致病机制。方法构建正常人、先证者母亲FⅩⅢA亚基mRNA表达质粒pET-22b（+）/FⅩⅢA和先证者FⅩⅢA亚基mRNA DelCD11-279大片段缺失的表达质粒pET-22b（+）/FⅩⅢA-Del,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE和Western blot法检测FⅩⅢA亚基蛋白的表达,Ni-NTA树脂结合柱纯化FⅩⅢA亚基蛋白质,EZ- LinkTM5-（Biotinamido）Pentylamine掺入法检测纯化FⅩⅢA亚基蛋白质活性。结果 pET-22b（+）/FⅩⅢA和pET-22b（+）/FⅩⅢA-Del经酶切及PCR鉴定构建成功,转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导后获特异高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白质的相对分子质量分别为83 200和51 900,用Ni-NTA树脂结合柱分离得到纯化蛋白质,Western blot方法分析表明重组的蛋白质是人FⅩⅢA亚基蛋白,先证者及其母亲的纯化FⅩⅢA亚基蛋白活性分别为正常人的0、95.87%。结论 FⅩⅢA亚基mRNA DelCD11-279大片段缺失导致编码截短的464个氨基酸的无活性FⅩⅢA亚基蛋白是先证者遗传性FⅩⅢ缺乏症的分子机制之一。