人心肌热休克蛋白27基因克隆及其高表达对大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

摘要

目的克隆和重组人心肌热休克蛋白27(HSP27)基因,观察HSP27高表达对大鼠心肌细胞氧化应激的影响. 方法将RT- PCR获得的人心肌HSP27基因全长cDNA,重组入质粒载体pCDNA3.1+.将重组体pCDNA3.1+/HSP27转染大鼠心肌细胞系H9c2,经G418选择性培养获得稳定转染细胞系;观察HSP27高表达对H2O2诱导的乳酸脱氢酶(LDH)释放和细胞凋亡的影响. 结果 (1)pCDNA3.1+/HSP27在293T和H9c2中表达良好;(2)0、100、250、500、1000 μmol/L H2O2引起的LDH释放,在HSP27高表达组和野生型组分别为0.396±0.017和0.390±0.009、0.437±0.014和0.416±0.015、0.471±0.018和0.417±0.009、0.505±0.030和0.657±0.022、0.547±0.027和0.661±0.011(均为P<0.001);(3)150 μmol/L H2O2 诱导的细胞凋亡在HSP27高表达和野生型组分别为总细胞数的(10.693±1.122)%和(4.027±1.628)%,P<0.01. 结论人心肌HSP27基因被成功克隆和重组,其在大鼠心肌细胞系H9c2的高度表达显著保护了该细胞的过氧化损伤.